Le diagnostic est évoqué chez un sujet qui se plaint de prurit et/ou lésions cutanées apparus dans un contexte épidémiologique incluant une notion de contage et/ou un manque d’hygiène. La mise en évidence des parasites permet la confirmation du diagnostic.
En cas de pédiculose du cuir chevelu, les lentes sont plus rapidement retrouvées que les poux. Elles sont brillantes et de couleur caramel lorsqu’elles contiennent un embryon vivant ; elles sont alors retrouvées près de la racine des cheveux, plus fréquemment autour des oreilles et au niveau de la nuque ; elles sont plus faciles à repérer chez un sujet aux cheveux blonds. Vides, elles sont blanchâtres et ressemblent à des pellicules qui restent fixées aux cheveux, résistant au lavage et au coiffage.
Elles s’observent alors de plus en plus loin de la racine des cheveux, pouvant persister plusieurs mois, sur les cheveux ; elles sont plus faciles à repérer chez un sujet aux cheveux bruns. Les poux sont plus difficiles à mettre en évidence. Ils sont recherchés sur le cuir chevelu en écartant les cheveux, mèche par mèche. L’utilisation d’un peigne fin (dit "peigne à poux") facilite grandement la récolte : le sujet parasité est peigné de préférence au-dessus d’une surface blanche et lisse sur laquelle se voient tout de suite les poux qui tombent. Dans de rares cas, essentiellement chez des sujets massivement infestés, les parasites peuvent s’observer spontanément se déplaçant sur les cheveux.
En cas de pédiculose à Pediculus humanus, poux et lentes doivent être recherchés à la face interne des vêtements ou la literie. Les insectes se cachent dans les plis où ils pondent leurs œufs. Les poux sont plus rapidement découverts, en particulier, lors d’infestation massive.
En cas de pthirose, les parasites sont recherchés sur les poils du pubis parfois axillaires, de la barbe mais aussi des cils et sourcils; ils peuvent se déplacer assez rapidement pour tenter de fuir vers les parties les plus cachées. Leur mobilité aide à leur découverte.
Pour les autres parasites (puces, punaises, tiques) le diagnostic d'espèce requiert un spécialiste entomologiste.