Le jour de la ponction folliculaire, le conjoint réalise un prélèvement de sperme. Dans certains cas particuliers, l'équipe médicale s'est assurée d'une réserve suffisante de gamètes mâles par autoconservation préalablement à la stimulation folliculaire.
En FIV classique, il s'agit de préparer une suspension de spermatozoïdes dont les caractéristiques sont aussi proches que possible de celle qui se trouve dans le tractus génital féminin en cas de normospermieDéfinitionÉtat d'un sperme normal, contenant des spermatozoïdes normaux en quantité moyenne..
Il existe différentes méthodes de préparation des spermatozoïdes, mais la plus utilisée est la séparation du sperme sur un gradient de densité. Le culotDéfinitionMatière ayant sédimenté lors d'une centrifugation. obtenu est ensuite re-suspendu dans du milieu de culture, le pourcentage de formes mobiles ainsi que la numération sont évalués. En fécondation in vitro, le nombre de spermatozoïdes nécessaires est d'environ 100000/ml contenant un ovocyte.
En fécondation in vitro avec micro-injection ou ICSI, la même séquence est utilisée lorsque que cela est possible, mais ici, un seul spermatozoïde est introduit dans le cytoplasmeDéfinitionContenu d'une cellule vivante. Plus exactement, il s'agit de la totalité du matériel cellulaire du protoplasme délimité par la membrane plasmique et le noyau. C'est une émulsion colloïdale à l'aspect granuleux constituée de cytosol ou de hyaloplasme et de plusieurs organites cellulaires (principalement des ribosomes, des vacuoles et des mitochondries). Le cytoplasme peut se diviser et former à l'extérieur de la cellule une masse gélatineuse, appelée ectoplasme, et qui contribue au mouvement cellulaire. Il peut alors présenter à l'intérieur une zone plus fluide, appelée endoplasme, où l'on trouve la majorité des organites. Le cytoplasme est un milieu riche en nutriments qui traversent la membrane plasmique et migrent vers les organites. ovulaire à l'aide d'une micropipette.
Les spermatozoïdes frais ou congelés de toute origine (éjaculat, biopsie testiculaire contenant des spermatozoïdes) peuvent être utilisés, à condition qu'ils soient vivants.
Après préparation selon les techniques déjà décrites, les spermatozoïdes sont placés dans une solution de Poly-Vinyl-PyrrolidoneDéfinitionPoly-Vinyl-Pyrrolidone (PVP) ou polyvinylpyrrolidone : Polymère soluble dans l'eau, consommable par l'homme. Il est utilisé dans les plasmas sanguins ou comme adjuvant en raison de sa solubilité dans l'eau et les solvants polaires. (PVP) qui les immobilise par sa viscosité.
Le spermatozoïde retenu est chargé dans la micropipette après cassure de son flagelle afin de lui enlever toute mobilité. Il est ensuite introduit dans le cytoplasme d'un ovocyte décoroniséDéfinitionDécoronisation : Détachement de la corona radiata (cellules autour de l'ovocyte) qui empêche de voir correctement la cellule, notamment le cytoplasme. L'ovocyte est aspiré doucement dans une pipette et on lui impose des mouvements de va-et-vient. Cette étape détache peu à peu les cellules de la corona radiata..
Une des conséquences de la stimulation est l'hétérogénéité de la cohorte ovocytaire. Tous les degrés de maturation peuvent être constatés. Dans la pratique actuelle, tous les ovocytes sont mis en fécondation en FIV et seuls les ovocytes jugés matures après décoronisation sont micro-injectés en ICSI.
L'observation des zygotesDéfinitionZygote : Œuf, cellule provenant de la fusion de deux gamètes : un ovule et un spermatozoïde. peut avoir lieu 20 à 24 heures après la fécondation in vitro. L'intérêt de l'examen détaillé des zygotes est de vérifier la réalité de la fécondation et d'en détecter d'éventuelles anomalies. Elle peut donner des renseignements utiles mais il y a souvent des faux positifs et des faux négatifs.
L'examen des embryons se fait en principe 40 à 48 heures après l'insémination. Cet examen, outre l'intérêt théorique qu'il peut présenter, est très utile au choix des embryons à transférer.
En effet, le taux de grossesse par transfert augmente avec le nombre d'embryons transférés jusqu'à un certain seuil, mais avec pour corollaire une majoration du risque de grossesse multiple. Différents paramètres entre en ligne de compte (âge de la patiente, rang de la tentative…) et le choix du nombre d'embryons à transférer doit être décidé au cas par cas. Les embryons surnuméraires, après recueil du consentement du couple, peuvent être congelés. Ils feront l'objet d'un replacement après préparation de l'endomètre sans repasser par toutes les étapes de la fécondation in vitro.
C'est la dernière étape du processus de la fécondation in vitro. Elle pourrait paraître la plus facile car sur le plan gynécologique le geste du transfert embryonnaire est le plus souvent sans difficulté. Mais il doit être préparé et réalisé avec attention pour éviter qu'un transfert embryonnaire inadéquat soit la cause de l'échec final de toutes les étapes antérieures. Il a lieu actuellement dans la majorité des cas à 48 h de la ponction. Il peut-être aussi plus tardif à cinq ou six jours, au stade blastocysteDéfinitionStade du développement embryonnaire précoce des mammifères (de 5 à 7 jours chez l'homme) au cours duquel coexistent les cellules périphériques, appelées cellules du trophectoderme (ou trophoblaste), à l'origine des structures extra-embryonnaires comme le placenta ou le cordon ombilical, et des cellules de la masse interne, qui forment le bouton embryonnaire et donnent naissance à l'embryon proprement dit et à quelques annexes embryonnaires., mais ceci nécessite l'utilisation d'autres milieux de culture.
Le transfert a lieu en ambulatoire, le plus souvent au laboratoire de fécondation in vitro lui-même afin d'éviter toute manipulation inutile et tout transport embryonnaire qui pourrait intervenir négativement sur ses capacités de développement.
La phase lutéaleDéfinitionPhase lutéale ou phase progestative ou phase post-ovulatoire : Phase se situant après l'ovulation et jusqu'au dernier jour du cycle ovarien. La phase lutéale se termine donc lorsque la menstruation commence. Au point de vue hormonal, la phase lutéale du cycle menstruel est caractérisée par la présence de la progestérone. Tout dépendant des femmes, cette phase dure entre 11 et 18 jours. Le follicule de la phase folliculaire se transforme en corps jaune au moment de l'ovulation et pendant la phase lutéale, le corps jaune se développe ou bien dégénère s'il n'y a pas eu fécondation. est habituellement soutenue par l'administration de progestéroneDéfinitionHormone stéroïde principalement sécrétée par le corps jaune des ovaires et impliquée dans le cycle menstruel féminin, la grossesse (progestagène : supporte la gestation) et l'embryogenèse. Dans le cycle ovarien, la progestérone inhibe les contractions rythmiques de la musculature utérine et crée un silence utérin sans lequel toute gestation serait impossible. naturelle parfois associée à de l'hCG en injectable selon les habitudes des équipes médicales.
Le premier dosage de β-hCG plasmatique a lieu 14 jours après la ponction folliculaire. Pour être interprétable le dosage de β-hCG plasmatique doit être fait au moins 7 jours après la dernière injection d'hCG exogène pour éviter un faux-positif.
Hamamah S, Déchaud H, Hédon B., Transfert monoembryonnaire : une alternative pour prévenir et éviter les grossesses multiples. Gynécologie Obstétrique & Fertilité. 2007 May;35(5):480-484.
