• Pré-requis et Objectifs
• Cours
  • Contenu
    • 1 - Généralités
    • 2 - Caractères de la bactérie
      • 2.1 - Morphologie (Figure 1)
        • 2 . 1 . 1 - MO à fond noir (X10 et X25)
        • 2 . 1 . 2 - Pour améliorer sa visualisation
        • 2 . 1 . 3 - Mobilité
        • 2 . 1 . 4 - Modifications avec le vieillissement
        • 2 . 1 . 5 - Division
        • 2 . 1 . 6 - Colorations
      • 2.2 - Structure
        • 2 . 2 . 1 - Axostyle
        • 2 . 2 . 2 - Cylindre cytoplasmique
        • 2 . 2 . 3 - Membrane cytoplasmique
        • 2 . 2 . 4 - Enveloppe
      • 2.3 - Caractères culturaux
        • 2 . 3 . 1 - Milieux de cultures
        • 2 . 3 . 2 - Conditions de cultures
        • 2 . 3 . 3 - Croissance
        • 2 . 3 . 4 - Aspect des cultures
        • 2 . 3 . 5 - Cas des prélèvements contaminés
        • 2 . 3 . 6 - Cas des hémocultures
      • 2.4 - Résistance - Vitalité
        • 2 . 4 . 1 - Conservation des souches
      • 2.5 - Caractères biochimiques
        • 2 . 5 . 1 - Besoins nutritifs
      • 2.6 - Produits élaborés
      • 2.7 - Caractères antigéniques
    • 3 - Pouvoir pathogène
      • 3.1 - Pouvoir pathogène expérimental
        • 3 . 1 . 1 - Animaux sensibles
        • 3 . 1 . 2 - Tableau clinique
        • 3 . 1 . 3 - Autopsie
      • 3.2 - Pouvoir pathogène naturel
        • 3 . 2 . 1 - Signes fondamentaux
        • 3 . 2 . 2 - Signes facultatifs
        • 3 . 2 . 3 - Evolution
      • 3.3 - Physiopathologie
      • 3.4 - Immunité
      • 3.5 - Prophylaxie – Traitement
        • 3 . 5 . 1 - Prophylaxie
        • 3 . 5 . 2 - Sensibilité aux antibiotiques
        • 3 . 5 . 3 - Traitement
      • 3.6 - Epidémiologie
        • 3 . 6 . 1 - Répartition géographique
        • 3 . 6 . 2 - Cycle épidémiologique (Figure 3)
        • 3 . 6 . 3 - Mode de contamination
    • 4 - Diagnostic de laboratoire
      • 4.1 - Chronologie des examens en fonction de l’évolution
      • 4.2 - Diagnostic direct
        • 4 . 2 . 1 - Prélèvements
        • 4 . 2 . 2 - Culture
        • 4 . 2 . 3 - Amplification génique
      • 4.3 - Diagnostic indirect
        • 4 . 3 . 1 - Réaction macroscopique ou macro-agglutination sur lame
        • 4 . 3 . 2 - Méthode par ELISA
        • 4 . 3 . 3 - Réaction microscopique d'agglutination-lyse (MAT)
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• Annexes

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• Auteurs
• Contacts

4  -  Diagnostic de laboratoire

4 . 1  -  Chronologie des examens en fonction de l’évolution

Il existe 3 phases :

• Phase septicémique: hémoculture et LCR jusqu'au 8ème jour.
• Phase immunitaire: débute au 6ème jour pour les IgM (non spécifique du sérogroupe en cause).
• Phase d’élimination des leptospires dans les urines du 15ème au 25ème jour en l'absence d'antibiothérapie.

4 . 2  -  Diagnostic direct

4 . 2 . 1  -  Prélèvements

Sang :   recueil sur héparine ou EDTA (jamais de citrate).
            examen en MO à fond noir (spécificité médiocre, nombreux pièges)
            ensemencement sur milieux de cultures appropriés (cf Q.S.)
            inoculation à l'animal avec prise de température.

LCR : idem.

Urines : en l'absence d'antibiothérapie.
            ensemencement rapide car lyse des bactéries en moins de 6 h.
            addition de 5 fluoro-uracile pour les urines contaminées.
            inoculation à l'animal.

Pour l’amplification génique, les mêmes prélèvements peuvent être utilisés.

4 . 2 . 2  -  Culture

Il est possible de mettre les prélèvements en culture en utilisant des milieux spécifiques : Ellinghausen et McCullough modifié par Johnson et Harris (EMJH), incubé à environ 29°C.

Le temps de génération de ces bactéries étant long, l'incubation est poursuivie pendant 2 mois. L'identification des souches isolées est réalisée par le Centre National de Référence des Leptospires.

La détermination du sérogroupe se fait avec une batterie de sérums pour recherche d’une micro-agglutination (fonction du titre le plus élevé).

La recherche du sérovar est du domaine des laboratoires de référence (technique d’agglutination – adsorption).

4 . 2 . 3  -  Amplification génique

Diagnostic par PCR : amplification des gènes rrs (331 bp) spécifique du genre Leptospira associée à une hybridation, lipL32, hap1(animaux).

Le diagnostic d’espèce utilise les techniques de biologie moléculaire : sondes, MRSP (Mapped Restriction Site Polymorphisms), hybridation ADN/ADN

4 . 3  -  Diagnostic indirect

Positivité des réactions sérologiques à partir du 6ème jour.

4 . 3 . 1  -  Réaction macroscopique ou macro-agglutination sur lame

Elle n’est plus recommandée.

4 . 3 . 2  -  Méthode par ELISA

Elle se réalise avec l’antigène L. biflexa sérovar patoc. Son intérêt est de détecter les IgM (6^ème jour) et les IgG.

Le seuil fixé à 1/400.

Cependant, dans de nombreux cas de leptospirose dus aux sérogroupes Grippotyphosa et Australis, les IgM ne sont pas ou mal détectées. Cette réaction se négative généralement dans un délai de 2 à 3 mois.

4 . 3 . 3  -  Réaction microscopique d'agglutination-lyse (MAT)

C’est la réaction de Martin - Pettit, Kolochine-Erber.

lle met en jeu les propriétés lytiques et agglutinantes du sérum pour le sérotype utilisé: bactériolyse en présence de complément.

Sa lecture associe la présence de leptospires libres, la force d'agglutination, l'intensité de la lyse.

Le titre-seuil > à 100. ou augmentation par 4 du titre entre un sérum précoce et tardif.

La limite de la réaction se lit dans la dilution présentant moins de 50% de leptospires demeurées libres entre les agglutinats et non plus celle présentant une moindre différence avec la dilution supérieure.

-La réaction est positive dès le 8^ème-10^ème jour. On observe une décroissance des titres en 3-6 mois avec quelques fois des taux résiduels au-délà.

Il existe des faux :

• positifs : sujets guéris avec anticorps mais cinétique plate.
• négatifs:         
  
  • prélèvement précoce
  • antibiothérapie précoce.
  • sérotype inhabituel
  • variations individuelles.