• Pré-requis et Objectifs
• Cours
  • Contenu
    • 1 - Généralités
    • 2 - Caractères de la bactérie
      • 2.1 - Morphologie (Figure 1)
        • 2 . 1 . 1 - MO à fond noir (X10 et X25)
        • 2 . 1 . 2 - Pour améliorer sa visualisation
        • 2 . 1 . 3 - Mobilité
        • 2 . 1 . 4 - Modifications avec le vieillissement
        • 2 . 1 . 5 - Division
        • 2 . 1 . 6 - Colorations
      • 2.2 - Structure
        • 2 . 2 . 1 - Axostyle
        • 2 . 2 . 2 - Cylindre cytoplasmique
        • 2 . 2 . 3 - Membrane cytoplasmique
        • 2 . 2 . 4 - Enveloppe
      • 2.3 - Caractères culturaux
        • 2 . 3 . 1 - Milieux de cultures
        • 2 . 3 . 2 - Conditions de cultures
        • 2 . 3 . 3 - Croissance
        • 2 . 3 . 4 - Aspect des cultures
        • 2 . 3 . 5 - Cas des prélèvements contaminés
        • 2 . 3 . 6 - Cas des hémocultures
      • 2.4 - Résistance - Vitalité
        • 2 . 4 . 1 - Conservation des souches
      • 2.5 - Caractères biochimiques
        • 2 . 5 . 1 - Besoins nutritifs
      • 2.6 - Produits élaborés
      • 2.7 - Caractères antigéniques
    • 3 - Pouvoir pathogène
      • 3.1 - Pouvoir pathogène expérimental
        • 3 . 1 . 1 - Animaux sensibles
        • 3 . 1 . 2 - Tableau clinique
        • 3 . 1 . 3 - Autopsie
      • 3.2 - Pouvoir pathogène naturel
        • 3 . 2 . 1 - Signes fondamentaux
        • 3 . 2 . 2 - Signes facultatifs
        • 3 . 2 . 3 - Evolution
      • 3.3 - Physiopathologie
      • 3.4 - Immunité
      • 3.5 - Prophylaxie – Traitement
        • 3 . 5 . 1 - Prophylaxie
        • 3 . 5 . 2 - Sensibilité aux antibiotiques
        • 3 . 5 . 3 - Traitement
      • 3.6 - Epidémiologie
        • 3 . 6 . 1 - Répartition géographique
        • 3 . 6 . 2 - Cycle épidémiologique (Figure 3)
        • 3 . 6 . 3 - Mode de contamination
    • 4 - Diagnostic de laboratoire
      • 4.1 - Chronologie des examens en fonction de l’évolution
      • 4.2 - Diagnostic direct
        • 4 . 2 . 1 - Prélèvements
        • 4 . 2 . 2 - Culture
        • 4 . 2 . 3 - Amplification génique
      • 4.3 - Diagnostic indirect
        • 4 . 3 . 1 - Réaction macroscopique ou macro-agglutination sur lame
        • 4 . 3 . 2 - Méthode par ELISA
        • 4 . 3 . 3 - Réaction microscopique d'agglutination-lyse (MAT)
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• Annexes

• Aide
• Auteurs
• Contacts

2 . 3  -  Caractères culturaux

2 . 3 . 1  -  Milieux de cultures

Il n’y a pas de croissance sur milieux ordinaires. La bactérie nécessite des milieux enrichis en :

• sérum de lapin : nature liquide (Reiter et Ramme; Stuart) ou semi-solide (Fletcher).
• albumine et acides gras (tween) (Ellinghausen-Mc Cullough-Johnson-Harris) +++.

Il est nécessaire d'ensemencer au moins 5 tubes de chacun des 2 types de milieux pour diluer les inhibiteurs (surtout le sang).

Il est possibilité d’utiliser des flacons d’hémocultures type BacT/Alert MB (mycobactéries, sans supplément d’enrichissement) pour la détection des leptospires. Permet une bonne viabilité des leptospires sur 14 jours (temps moyen de détection : 3-4 J).

2 . 3 . 2  -  Conditions de cultures

Les milieux doivent avoir un pH alcalin: 7.2 - 7.6.

La température d'incubation de 10° à 30°C; optimum à 28°C (lyse rapide à 37°C).

Les milieux sont à placer à l'obscurité et agités si possible.

Il faut réaliser un inoculum abondant : 1/10 du milieu de culture: ensemencer 1 volume de sang ou urine pour 10 ml de milieu de culture, puis diluer au dixième avec 5 tubes de milieu afin de diluer les inhibiteurs.

2 . 3 . 3  -  Croissance

• début de croissance au 2^e J; abondante au 3^e- 6^eJ jusqu'au 10° J.
• croissance maximale au 6^e- 14^eJ.
• conservation des cultures jusqu'à la 4^e- 6^e semaine.
• lecture des cultures tous les 5-7J.

2 . 3 . 4  -  Aspect des cultures

Il y a peu de modifications macroscopiques des milieux :

• liquide: très léger trouble: faire les prélèvements de contrôle quelques centimètres en dessous de la surface.
• semi-solide: disque linéaire à 1-3 cm en dessous de la surface: faire les prélèvements de contrôle à ce niveau.

2 . 3 . 5  -  Cas des prélèvements contaminés

Il est nécessaire de mettre en culture le prélèvement sur un milieu contenant de la 5-fluoro-uracile (100 mg/l), néomycine (5-25 mg/l), cycloheximide (0,5 mg/l). Ces prélèvements contaminés doivent être filtrés avec des filtres entre 0,22 µm et 0,45 µm.

Afin d’enrichir le prélèvement en bactéries, il est possible de faire un passage sur animal : hamster ou cobaye jeune; inoculation du prélèvement en intra-péritonéal (0.5-1 ml); après 10-15 min prélèvement du sang au niveau du coeur qui est mis en culture.

La mise en culture des urines est réalisée sur milieux contenant du 5-fluoro-uracile (100 mg/l) ou par filtration des urines sur membranes (diamètre entre 0,22 et 0,45 µm). Nécessité de diluer 10 fois les urines.

2 . 3 . 6  -  Cas des hémocultures

Le prélèvement pour hémoculture ne doit être réalisé uniquement la 1^ère semaine de la maladie.

Il est possibilité d’observer une inhibition de la croissance en présence d'héparine, d'oxalate ou de citrate de sodium. Le broyage du caillot est recommandé avant de le mettre en culture.