La numération-formule sanguine montre une anémie microcytaire hyposidérémique. Discrète au début, son importance dépend de l’espèce — Ancylostoma est plus hématophage — et de la charge parasitaire. Une hyperleucocytose avec hyperéosinophilie observée au début de l’infestation se normalise progressivement.
L’examen parasitologique des selles permet le diagnostic d’ankylostomose par la mise en évidence des œufs dans les selles, 1 mois après l’infection, mais ne permet pas de distinguer les deux espèces. C’est la culture des selles (coproculture parasitaire) qui permet de distinguer les deux espèces à partir de la morphologie des larves.
La sérologie n’est pas contributive au diagnostic.